AI요약

기존 mRNA 3'말단 서열 분석 방법은 핵산 반복서열인 폴리(A) 서열 분석에 어려움이 있었고, 소량의 시료로는 많은 유전자 정보를 얻기 어려웠습니다. 본 기술은 이러한 한계를 극복하기 위해 mRNA 3'말단에 3'헤어핀 어댑터를 연결하고 부분적으로 절단한 후 5'어댑터를 연결하여 시퀀싱하는 'mTAIL-seq' 프로토콜을 제안합니다. 이 방법은 바이오틴이 결합된 3'헤어핀 어댑터를 사용하여 폴리(A)+ RNA를 특이적으로 캡쳐하고, RNase T1으로 mRNA를 부분 절단한 뒤 스트렙타비딘 비드로 분리 및 정제하는 과정을 거칩니다. 이후 증폭 및 일루미나 시퀀싱 방식을 적용하여 정규화된 T 시그널 분석을 통해 폴리(A) 서열의 시퀀싱 오류를 극복하고 길이를 정밀하게 결정합니다. 이를 통해 소량의 시료에서도 많은 유전자의 mRNA 3'말단 서열 정보를 효율적이고 신속하게 분석할 수 있으며, 시간과 비용을 크게 절감할 수 있습니다. 특히 배아발생, 암, 신경전달 등 다양한 생명현상에서 RNA 생성/소멸 및 단백질 생산 연구에 필수적인 도구로 활용될 것으로 기대됩니다.